<<
>>

2.2.1 Получение фракции отмытых эритроцитов

Для получения эритроцитов, отмытых от плазмы и очищенных от других форменных элементов, использовали кровь в объеме 2 мл на одну центрифужную пробирку объемом 10 мл (Sarstedt, США) и доводили объем до 8 мл путем смешивания с охлажденным (+4 °C) изотоническим раствором NaCl (INEOS Enterprises, США и PanEco) с концентрацией 0,154 моль/л.

Данную смесь центрифугировали в течение 10 мин при 6000 об/мин на центрифуге с охлаждением SIGMA 2-16PK и угловым ротором 12141 (Sigma Laborzentrifugen, Германия) при температуре +12 °C. Надосадочную жидкость, содержащую плазму и тонкий слой лейкоцитов, удаляли с помощью автоматических пипеток Digital (Thermo Fisher Scientific, США). К осажденным эритроцитам повторно добавляли раствор хлорида натрия, доводили до исходного объема, осторожно перемешивали и снова центрифугировали в том же режиме. Операцию отмывки эритроцитов повторяли трижды.

По завершении отмывки эритроцитов, из пробирок осторожно удаляли по 4 мл супернатанта, который использовался в дальнейшем в качестве теста на отсутствие гемолиза этих клеток и наличия компонентов плазмы в среде. Тест выполнялся путем визуальной оценки прозрачности и отсутствия окраски супернатанта и окончательно — спектрофотометрически в диапазоне 400-600 нм.

Далее, осторожно и медленно, не создавая турбулентностей, вводили наконечник пипетки через верхний слой клеток, содержащий небольшое количество примесных форменных элементов крови, в эритромассу, ко дну

пробирки. Не касаясь дна и стенок, осуществляли забор эритроцитов в объеме 0,5

мл и переносили их в новую центрифужную пробирку.

<< | >>
Источник: Лавриненко Игорь Андреевич. РАЗРЕШЕНИЕ, ИДЕНТИФИКАЦИЯ И АНАЛИЗ ПЕРЕКРЫВАЮЩИХСЯ ПОЛОС ПОГЛОЩЕНИЯ ХРОМОФОРОВ НЕКОТОРЫХ ПРОСТЫХ И СЛОЖНЫХ БЕЛКОВ В ДИАПАЗОНЕ ДЛИН ВОЛН 240-320 НМ. 2015

Еще по теме 2.2.1 Получение фракции отмытых эритроцитов:

  1. § 2. Преступления, связанные с получением и дачей взятки1254
  2. Полученные в ходе исследования материалы свидетельствуют о том, что на региональном уровне для руководителей любого ранга характерно абсолютное нежелание учитывать особенности СМИ как самостоятельного социального института, стремление превратить журналистов в своих подручных, которым положено выполнять спущенные им поручения.
  3. ПРАВО НА ПОИСК И ПОЛУЧЕНИЕ ИНФОРМАЦИИ
  4. Правда ли, что журналисты обладают большими правами, чем остальные граждане, при поиске и получении информации?
  5. 5.5 Разработка ускоренной технологии получения крепкого напитка
  6. 5.1.2. Получение фурфурола в качестве целевого продукта при различных режимах гидролиза
  7. Качествокормовых белковых добавок, полученных в промышленных условиях.
  8. Папские и королевские финансы: от ведения банковских дел до получения должностей
  9. ГАЛЛИЙ ИЗ СТОЧНЫХ ВОД ПРОЦЕССА ПОЛУЧЕНИЯ ОКСИДА АЛЮМИНИЯ
  10. СТЕКЛО ИЗ ОТХОДОВ ГОРОДСКОГО ХОЗЯЙСТВА
  11. Процесс получения товарного газа