<<
>>

2.2.11.1 Коррекция молярных спектров поглощения метгемоглобина Д

При расчете молярного спектра поглощения метгемоглобина Д за основу был принят спектр поглощения метформы гемоглобина, полученной окислением раствора гембелка, выделенного из крови доноров (и преимущественно содержащим оксигемоглобин Д).

В результате окисления реагентом в растворе, в основном, присутствует метформа гемоглобина Д и F. В диапазоне длин волн от 320 нм и более спектры этих форм практически идентичны и присутствием MtHbF можно пренебречь. Однако для диапазона поглощения апобелковой компоненты эту разность необходимо учитывать.

Для учета составляющей поглощения фетального гемоглобина в растворе гембелка, полученного из крови доноров, необходимо выделить из общего гемоглобина фракцию фетального гемопротеида (п. 2.2.6).

Из отношения поглощения оксиформы фетального гемоглобина к общему гемоглобину (его оксиформе) находим долю HbFO2 по уравнению (8):

AHbFO2

®HbFC>2 _ *HbAO2+HbFO2 . (8)

Д540

Измерения показателей поглощения оксигемоглобина F из крови доноров и кордовой крови осуществляли в атмосфере воздуха, при комнатной температуре.

В норме содержание фетального гемоглобина в крови доноров соответствует значению порядка 0,5 % от общего гембелка.

Чтобы вычесть из молярного спектра поглощения метгемоглобина, составляющую метгемоглобина F, необходимо получить спектр поглощения фетального гемоглобина из образца, где его концентрация достаточно высока (более 75 %). Это позволяет избежать применения реагентов (п. 2.2.6), оказывающих влияние на спектральные свойства гемоглобина F (а также в значительной степени на гемоглобин A), что актуально, прежде всего, для УФ- диапазона длин волн, в частности, области поглощения апобелковой компоненты. Кроме того, при использовании таких реагентов с уменьшением длины волны в растворах существенно увеличивается рассеяние света гембелком и соответственно эту составляющую компоненту необходимо будет учитывать (рис.

8) . Это, в свою очередь, приводит к неоправданному увеличению объема вычислений.

В норме содержание фетального гемоглобина в кордовой крови рожениц соответствует значению порядка 80 % от общего гембелка. Точное его значение рассчитывается по уравнению (8). Общую концентрацию гемоглобина находили гемоглобинцианидным методом и рассчитывали по уравнению (4). Окисляя исходный раствор гембелка, выделенный из кордовой крови, получали преимущественно спектр поглощения фетального метгемоглобина.

Далее, из молярного спектра поглощения метгемоглобина (полученного исходно из крови доноров) вычитали молярный спектр поглощения метгемоглобина F (полученный исходно из кордовой крови). Доля, с которой будет вычитаться молярный спектр фетального метгемоглобина, рассчитывается как отношение доли фетального гемоглобина в растворе метгемоглобина, полученного из крови доноров (®MftmF), к доле такового, полученного из кордовой крови (raMtH,F) по уравнению (9):

в,

Рис. 8. Влияние химических реагентов, используемых для выделения фетального гемоглобина, на спектры поглощения белка

Обозначения: 1 — спектр поглощения оксигемоглобина F,

выделенного по методике К. Зингера; 2 — спектр поглощения оксигемоглобина F, полученного вычитанием составляющей оксигемоглобина A; 3 — спектр поглощения оксигемоглобина A; s — молярный показатель поглощения

Примечание: кривая (1) содержит сравнительно высокую

составляющую рассеяния света образцом относительно длинноволнового участка спектра (>500 нм)

Так как при этом молярный показатель поглощения будет уменьшен на Юмм^8М1НЬг, то и результирующий спектр следует нормировать, умножая на g, уравнение (10):

1

g = 71“------ > (10)

1 a)MtHbF

где g — нормирующий коэффициент.

Таким образом, получили откорректированный молярный спектр поглощения метгемоглобина A, который будет использован также и для последующей коррекции спектров других гемпроизводных.

<< | >>
Источник: Лавриненко Игорь Андреевич. РАЗРЕШЕНИЕ, ИДЕНТИФИКАЦИЯ И АНАЛИЗ ПЕРЕКРЫВАЮЩИХСЯ ПОЛОС ПОГЛОЩЕНИЯ ХРОМОФОРОВ НЕКОТОРЫХ ПРОСТЫХ И СЛОЖНЫХ БЕЛКОВ В ДИАПАЗОНЕ ДЛИН ВОЛН 240-320 НМ. 2015

Еще по теме 2.2.11.1 Коррекция молярных спектров поглощения метгемоглобина Д:

  1. 1.1. Рентгеноэлектронные спектры Р-дикетонатов европия (III)
  2. НЕПРЕРЫВНЫЙ СПЕКТР
  3. 2.2.5 Регистрация спектров поглощения: спектрофотометры и протокол измерения
  4. 2.2.5 Подходы, направленные на снижение фотометрических ошибок и увеличение разрешения в спектрах поглощения
  5. 2.2.5 Коррекция молярных спектров поглощения производных гемоглобина на присутствие неосновных компонент
  6. 2.2.11.1 Коррекция молярных спектров поглощения метгемоглобина Д
  7. 2.2.11.1 Коррекция молярных спектров поглощения дезоксигемоглобина A
  8. 2.2.11.1 Коррекция молярных спектров поглощения карбоксигемоглобина А
  9. 2.2.11.1 Коррекция молярных спектров поглощения оксигемоглобина A
  10. 2.2.11.1 Коррекция молярных спектров поглощения оксигемоглобина F
  11. 2.2.5 Усреднение молярных показателей поглощения в спектрах производных гемоглобина