<<
>>

2.2 Полимеразная цепная реакция и рестрикционный анализ

Для типирования исследуемых вариантов гена АВСА1 использовали амплификацию соответствующих участков ДНК методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим рестрикционным анализом амплифицированных фрагментов.

Продукты ПЦР и рестрикционного анализа подвергали электрофоретическому разделению при силе тока 30мА и напряжении 150В в полиакриламидном геле (ПААГ) соответствующей концентрации в трис-боратном буфере (0.9M Tris-OH, 0.9M борной кислоты, 20мМ ЭДТА). Продолжительность электрофореза определяли по движению в ПААГ красителей ксилен-цианола и бромфенолового синего, входящих в состав буфера для нанесения проб (водный раствор 0.25% ксилен-цианола, 0.25% бромфенолового синего, 30% глицерина), результаты визуализировали в ультрафиолете после окрашивания бромистым этидием (Маниатис и соавт., 1984).Использовали аппарат для вертикального электрофореза VE-4 фирмы "Helicon" (Россия).

Последовательности использованных праймеров и зондов (Zwarts et al., 2002) (Бигль, Санкт-Петербург), представлены в Таблице 1

Таблица 1

R219K FOR 5'- TGACAAGTCTGTGC AATGGA -3' REV 5'- GGCTTAAACTCAGCCACACC -3'
(-17)G>C FOR 5-

CTGCTGAGT GACTGAACTACATAAACAGAGGCCGGGTA -3' REV 5'- CCACTCACTCTCGTCCGCAATTAC -3'

319ins
<< | >>

Еще по теме 2.2 Полимеразная цепная реакция и рестрикционный анализ:

  1. Тест-системы иммуноферментныеи на основе полимеразной цепной реакции
  2. § 3.2.3. МЕТОДИКА ФОРМИРОВАНИЯ И РАЗВИТИЯ СИСТЕМЫ ПОНЯТИЙ О ХИМИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ Структура системы понятий о химической реакции
  3. 4.3.2. Ивент-анализ и возможности его применения для анализа международных конфликтов
  4. 6.4. Практические особенности инструментария контент-анализа газетных СМИ, описания и анализа результатов
  5. Общая схема формирования и анализа основных групп показателей в системе комплексного экономического анализа.
  6. 2.7 Норма реакции генотипа
  7. Аллергические реакции
  8. РЕАКЦИИ ПОСТОРОННИХ
  9. § 2.2.2. Предпринимательские реакции и маркетинг
  10. КОНТРНАСТУПЛЕНИЕ РЕАКЦИИ
  11. 2.3. Реакция контрпросветителей
  12. РЕАКЦИЯ "БЕШЕНЫХ"
  13. РЕАКЦИИ ТРЕВОГИ У ГАЛОК
  14. Занятие 9.8 РЕАКЦИЯ НА ДВИЖУЩИЙСЯ ОБЪЕКТ
  15. Б.Условные электрокорковые реакции