<<
>>

2.3 Выделение фракции моноцитов периферической крови.

Для создания банка M-CSF макрофагов был осуществлен забор крови в обследованных группах. Из локтевой вены утром натощак брали 40 мл крови в стерильную пластиковую пробирку объемом 50 мл, содержащую 3 мл стерильного 3,8% цитрата натрия в 0,15 М изотоническом фосфатном буфере (рН=7,35).

Для получения макрофагов свежесобранную кровь смешивали в равном соотношении с фосфатно-солевым буферным раствором (PBS). В стерильную пластиковую пробирку вносили фиколл (р=1.077, БиоЛот, Санкт-Петербург) из расчета 0,5 мл на 1 мл полученной суспензии крови. Смесь наслаивали на фиколл, центрифугировали (1500 об/мин, 30 мин). В стерильных условиях пипеткой с границы раздела плотности отбирали фракцию мононуклеаров. Мононуклеары промывали в PBS, центрифугировали (1500 об/мин, 15 мин.). Клетки инкубировали в СО2-инкубаторе (5% СО2 и 95% атмосферного воздуха) при 100% влажностив и 37°С течение 2 ч. После чего следовала трехкратная промывка в PBS и прикрепившиеся к чашкам Петри моноциты культивировали в культуральной среде альфаМЕМ, содержащей 10 % сыворотку крови плодов коровы, 5 мкг/мл антибиотиков (пенициллин G и стрептомицин) в присутствие 15 нг/мл колониестимулирующего фактора макрофагов M-CSF (R&D Systems, США) в СО2- инкубаторе (5% СО2 и 95% атмосферного воздуха) при 100% влажностив и 37°С в течение 5 суток с ежедневной заменой инкубационной среды. Клетки отмывали в PBS, центрифугировали, хранили при температуре -86 °С.
<< | >>
Источник: Демина Екатерина Петровна. Экспрессия генов транскрипционных факторов LXRalpha, LXRbeta, PPARgamma и транспортера ABCA1 при атеросклерозе. 2014
Помощь с написанием учебных работ

Еще по теме 2.3 Выделение фракции моноцитов периферической крови.:

  1. Препараты крови человека Жидкие лекарственные формы препаратов крови
  2. Занятие 12.5 ДИАГНОСТИКА ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ РЕЧИ У ДЕТЕЙ
  3. ПРАВЛЕНИЕ ДВОРЦОВОЙ ФРАКЦИИ
  4. ФРАКЦИЯ ШУВАЛОВА
  5. В. М. Пуришкевич: депутат-фракция
  6. Групповые факторы крови.
  7. Сдача крови
  8. 3.4. Выделение записей
  9. Раздел III. ОРГАНИЗАЦИЯ ДОНОРСТВА КРОВИ И ЕЕ КОМПОНЕНТОВ.
  10. 3.4. Перемещение по листу и выделение ячеек
  11. ПОРЯДОК МЕДИЦИНСКОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ ДОНОРА КРОВИ И ЕЕ КОМПОНЕНТОВ I. Общие положения
  12. Сухие и замороженные лекарственные формыпрепаратов крови
  13. Склероз сосудов и трофические дегенерации, вызываемые нарушениями микроциркуляции крови
  14. 4.5.2. Математические модели расписаний с выделенными обслуживающими устройствами